40-Parameter/37-Farben Spektrale Zytometrie Panel für robuste Immunprofilierung humaner lymphoider Subsets bei Krebspatienten

ZUSAMMENFASSUNG Die Analyse der Immunzellkompartimente bei Krebspatienten ist entscheidend zur Vorhersage der Wirksamkeit der Behandlung und des Rückfalls. Wir stellen ein robustes 40-Parameter, 37-Kanal Spektralzytometrie-Panel vor, das entwickelt wurde, um humane lymphoide Subsets und CAR-T-Zell-Expansion zu profilieren und dabei den Erschöpfungsstatus durch Profilierung von Immun-Checkpoints und aktivierenden Rezeptoren bei Krebspatienten zu bewerten. Entwickelt für das 5-Laser Cytek Aurora, optimiert das Panel die Auswahl der Fluorophore und verwendet drei Paare von sich gegenseitig ausschließenden Markern, die jeweils einem einzigen fluoreszenten Parameter zugeordnet sind, um die Einrichtung zu vereinfachen und robuste Daten zu gewährleisten. Dabei wird eine konservative Designentscheidung getroffen, um Ähnlichkeitsindizes unter 0,85 zu halten; obwohl höhere Überlappungen bei Anwendung bewährter Praktiken dennoch hochwertige Daten liefern können. Das Panel ermöglicht die detaillierte Analyse gut definierter lymphoider Subsets mittels konventioneller Gate-Strategie sowie die Detektion unkonventioneller Subsets mit variablen Expressionsmustern durch unüberwachte, algorithmusbasierte Analyse. Die Wirksamkeit des Panels wird durch einen Datensatz demonstriert, der den Verlauf des multiplen Myeloms von der prä-malignen Erkrankung bis zur hochaggressiven Phase simuliert.