Das Recycling von Vps68 hängt von Retromer und Mvp1/SNX8 ab

Hier analysierten wir das Recycling des Vps55/Vps68-Komplexes im endozytischen Weg von Hefezellen. Die beiden Proteine scheinen eine funktionelle Einheit zu bilden. Einzelne Deletionen von VPS55 oder VPS68 beeinflussten den Umsatz des endozytischen Cargo-Proteins Ste6 in gleichem Maße. Die doppelte Deletion hatte keinen additiven Effekt auf den Ste6-Umsatz. Vps55 und Vps68 waren voneinander abhängig für die korrekte zelluläre Lokalisation. Unter normalen Bedingungen lokalisierten sich die sfGFP-markierten Proteine zu punktförmigen Strukturen, aber wenn das entsprechende Partnerprotein fehlte, wurde eine Färbung des vakuolären Lumens beobachtet. Dies legt nahe, dass die verwaisten Proteine im Vakuolum über den Weg der multivesikulären Körper (MVB) abgebaut werden. Ein tyrosinbasierter Recycling-Signal wurde in der zytosolischen Schwanzregion von Vps68 identifiziert. Dieses Signal stellte das retromerabhängige Recycling und die Funktion einer Vps10-Variante, die keine eigenen Recycling-Signale besitzt, vollständig wieder her. In Übereinstimmung mit dieser Erkenntnis erwies sich das Recycling von Vps68 als abhängig von sowohl Retromer als auch Mvp1/SNX8. Diese Erkenntnis war unerwartet, da das Recycling von Vps55 anscheinend ausschließlich von Mvp1 abhängt. In Co-Immunpräzipitationsexperimenten wurde ein schwaches Co-IP-Signal zwischen Mvp1 und der Retromer-Untereinheit Vps26 nachgewiesen, was auf eine physische Assoziation zwischen Mvp1 und Retromer hinweist.