Simple: Eine sequenzielle Immunoperoxidase-Färbe- und Löschmethode

Die Fähigkeit, die Expression mehrerer Antigene gleichzeitig in Zellen und Geweben sichtbar zu machen, kann wertvolle Erkenntnisse über die zelluläre und organismische Biologie liefern. Standardmethoden sind jedoch auf den Einsatz von nur zwei oder drei simultanen Sonden beschränkt und wurden in paraffin-eingebettetem Gewebe bisher nicht routinemäßig angewandt. Wir haben einen neuartigen Ansatz namens sequenzielle Immunoperoxidase-Färbung und Löschen (SIMPLE) entwickelt, der die gleichzeitige Visualisierung von mindestens fünf Markern in einem einzelnen Gewebeschnitt ermöglicht. Unter Verwendung des alkohol-löslichen Peroxidase-Substrats 3-Amino-9-ethylcarbazol, kombiniert mit einer schnellen, nicht-destruktiven Methode zur Antikörper-Antigen-Dissoziation, demonstrieren wir die Fähigkeit, das Ergebnis einer einzelnen immunhistochemischen Färbung zu löschen, während die Gewebeantigenität für wiederholte Färbungsdurchgänge erhalten bleibt. SIMPLE wird erheblich durch den Einsatz eines Ganz-Flächenscanners erleichtert, der die Ergebnisse jeder sequentiellen Färbung ohne Informationsverlust erfassen kann.