Caractérisation Complète et Rapide par RMN des Anticorps Monoclonaux Thérapeutiques via un Marquage Différentiel des Fragments Fab dans Escherichia coli

La caractérisation de la structure et de la dynamique des anticorps monoclonaux thérapeutiques (mAbs) par spectroscopie RMN a bénéficié des avancées récentes dans les méthodes de préparation d'échantillons pour les fragments Fab et Fc isotopiquement marqués. Ici, nous proposons une méthode simple et accessible utilisant E. coli pour produire séparément les chaînes lourdes et légères, permettant ainsi un marquage différentiel de l'une ou l'autre chaîne du fragment refoldé. Ceci a été démontré sur les fragments Fab de l'adalimumab, bevacizumab, infliximab, rituximab et trastuzumab. Le nouveau schéma de marquage a produit des spectres RMN avec presque aucune superposition de résonances, permettant des assignations quasi-complètes (>90%) des résonances du squelette en moins d'une heure. De plus, une assignation quasi-complète des groupes méthyle des chaînes latérales a été réalisée, autorisant les assignations d'Avastin. Le temps total allant de la boîte de Petri à l'assignation finale du squelette était de 5 semaines par chaîne.