非スーパーアゴニストCD28ベースの二重信号T細胞エンゲージャーの標的

背景：二特異性T細胞エンゲージャーは、血液の悪性腫瘍および固形腫瘍の両方で有望な臨床進展を示しているが、CD3の関与による単一信号活性化によって引き起こされるT細胞の無反応性を含む複数の課題により治療効果は依然として限られている。CD28は重要な共刺激分子として、TCRで媒介される一次活性化信号との相乗的相互作用を通じてT細胞の機能を強化し、抗腫瘍効果を高める。非スーパーアゴニストのCD28二特異性抗体は抗腫瘍効果を高める一方で、全身毒性を最小限に抑えることができる。癌精巣抗原-1（KK-LC-1）は、さまざまな悪性腫瘍で過剰発現する癌特異的抗原であり、腫瘍特異的免疫療法の有望な標的として浮上している。本研究では、非スーパーアゴニストCD28ベースの共刺激メカニズムを用いたKK-LC-1を標的とした二重信号T細胞エンゲージャー戦略の開発が重要である。方法：ファージディスプレイ技術を用いて、KK-LC-1およびCD28を標的としたデザインアンクリンリピートタンパク質の成功裏な取得に基づき（KD = 8.985 nMおよび7.43 nM）、二つのT細胞エンゲージャー（KK-LC-1×CD3およびKK-LC-1×CD28）を設計した。KK-LC-1デザインアンクリンリピートタンパク質の腫瘍特異的結合活性は、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリー、共焦点顕微鏡、および生体内イメージングを用いて確認した。次に、これをCD3単鎖可変フラグメントおよびCD28デザインアンクリンリピートタンパク質とそれぞれ融合させ、二つのT細胞エンゲージャーを構築した。その生物学的活性および抗腫瘍効果は、フローサイトメトリック分析、共焦点顕微鏡イメージング、および生物発光定量法を用いて系統的に評価した（n=5）。結果：T細胞エンゲージャーKK-LC-1×CD3およびKK-LC-1×CD28は、KK-LC-1陽性腫瘍細胞およびT細胞の両方に対して高い結合親和性を示した。これらのエンゲージャーの共投与は、T細胞の活性化と抗腫瘍効果（88%対66%、p<0.001）を有意に増強した。生体内では、併用が腫瘍成長を59.6%抑制した（単剤療法と比較、p<0.05）とともに、腫瘍内のCD8+浸潤（5.4倍、p<0.001）およびCD4+浸潤（2.7倍、p<0.001）が向上した。PD-1×CTLA-4二特異性抗体を組み合わせることで、中位生存期間が44日から48日へと延長された（p<0.05）。結論：KK-LC-1を標的とした二重信号T細胞エンゲージャー戦略の固形腫瘍治療における実現可能性を確認し、PD-1×CTLA-4二特異性抗体との組み合わせが前臨床研究において抗腫瘍効果を相乗的に高めることを示した。