新規遺伝子修飾CARレンチウイルスベクターの抗腫瘍活性：ヒト化モデルにおける検証

要旨 はじめに：従来の体外製造CAR-T製品の臨床的および物流的課題を軽減するため、in vivoで遺伝子修飾を行うCAR（GCAR）プラットフォームが開発された。このGCARプラットフォームは、CD3を標的とするNHP/ヒト反応性レンチウイルスベクター（LVV）と、補体系抵抗性の融合因子を組み込み、CD3zetaベースのCARと増殖、持続性、細胞毒性に最適化された小型合成共刺激タンパク質（FD）をコードしている。GCAR LVVの標的細胞に対する強力かつ特異的な持続的細胞毒性誘導能を、in vitroおよびヒト化モデルおよび非ヒト霊長類モデルで評価した。M. nemestrinaにおいて、GCAR CD20 CARはFDを含まない従来の41BB CARをコードするLVVと比較し、B細胞除去能を評価した。方法：6Lおよび25Lスケールで製造した抗CD19および抗CD20 LVVを用いて、in vitroおよびin vivoでM. nemestrinaおよびヒトPBMCにおけるCD3反応性を評価した。GCAR LVV（抗CD20 CARおよびFDコード）のヒトおよびNHP血清およびCD3陽性リンパ球に対する補体感受性および活性化アッセイを実施した。精製LVVを用いた段階的用量（IVまたはIN）をNHPで評価し、フローサイトメトリーでB細胞数を計測し、臨床化学、血液学および身体検査で安全性を確認した。結果：ヒトおよびnemestrinaのPBMCにGCAR LVVを曝露すると、用量および標的依存的な細胞溶解が生じ、Raji-Luc播種PBMCヒト化DKO NSGモデルで迅速な腫瘍消失が認められた。CD34ヒト化モデルでは、GCAR LVVにより持続的なB細胞除去を伴うCAR-T細胞が8週間に渡って生成された。GCAR CD20 LVVのIVおよびIN投与は、NHPで重篤なサイトカイン放出症候群や神経毒性なしに良好に許容された。FDを含むCD20 CARのIV投与後のB細胞除去動態は用量依存的であり、最小用量では除去開始が投与後21日から遅延し、最大用量では7日目にB細胞無形成が確認された。一方で、FDを含まない41BB CD20 CARコードのGCAR LVVは、IVおよびIN投与後7日目にB細胞除去を誘発したがその持続期間は短かった。結論：GCAR LVVは機序的、マウス、ヒト化およびNHP免疫系を横断して遺伝子改変リンパ球を生成し、持続的なCAR依存性細胞除去を実現した。FDの組み込みにより細胞拡大および持続性がさらに向上し、リンパ除去やサイトカイン補助なく体外製CAR-T活性プロファイルを実現する可能性がある。急性および亜急性の安全性シグナルの欠如、非標的細胞への低い導入、血清補体抵抗性、深いB細胞除去は、新規遺伝子修飾CARアプローチとしてGCARプラットフォームの次世代臨床評価の有望性を示している。引用形式：Michael Betts, Matilda Mostrom, Ewa A. Jaruga-Killeen, Frederic Vigant, Anirban Kunda, Michelle Andraza, Cody Gowan, Iryna Oliinyk, Gregory Wade, Gregory Schreiber, Carter Bir, Jason P. Dufour, Robert V. Blair, Nicholas J. Maness, H. Michael Shepard, Gregory Ian Frost. Anti-tumor activity in humanized xenograft models and B-cell aplasia in non-human primates with a novel CD3-directed in vivo gene-modifying CAR (GCAR) lentivector encoding chimeric antigen receptors and a cellular fitness-enhancing co-stimulatory protein abstract. In: Proceedings of the American Association for Cancer Research Annual Meeting 2026; Part 1 (Regular Abstracts); 2026 Apr 17-22; San Diego, CA. Philadelphia (PA): AACR; Cancer Res 2026;86(7 Suppl):Abstract nr 276.