박테리오파지 SP6 프로모터를 포함하는 플라스미드에서 생물학적으로 활성 있는 RNA 및 RNA 하이브리다이제이션 탐침의 효율적인 시험관 합성법

거의 모든 구조의 순수 단일 가닥 RNA를 합성하기 위한 간단하고 효율적인 방법을 기술한다. 이 시험관내 전사 시스템은 SP6 프로모터에서만 전사를 개시하는 박테리오파지 SP6 RNA 중합효소의 특이적인 RNA 합성에 기반한다. 우리는 SP6 프로모터가 폴리링커 서열 바로 상류에 위치한 편리한 클로닝 벡터를 구축했다. 이러한 SP6 벡터를 사용하여, 시험관내 RNA 합성을 위한 최적 조건을 확립하였다. SP6 유래 RNA를 핵산 블롯 및 용액 하이브리다이제이션 탐침으로서의 장점과 활용도를 입증하였다. 높은 특이적 활성을 가진 단일 가닥 RNA 탐침이 쉽게 제작 가능하며, 핵산 하이브리다이제이션 방법의 민감도를 상당히 향상시킬 수 있음을 보였다. 또한, SP6 전사 시스템은 RNA 가공(1,5,9) 및 번역 연구(동반 논문 참조)를 위한 RNA 기질을 준비하는 데 활용할 수 있다.