Entrega Mediada por Nanopartículas de Ouro Não Virais de Ribonucleoproteínas CRISPR‐Cas9 e Transgenes de DNA Longos em Células Sanguíneas Primárias

A edição gênica usando sistemas CRISPR ganhou impulso pelo seu potencial de tratar várias doenças, mas a entrega continua sendo um grande desafio. Já relatamos anteriormente uma formulação de nanopartículas de ouro totalmente sintética que pode entregar de forma segura e eficaz múltiplos sistemas CRISPR diferentes na forma de ribonucleoproteínas (RNP) em células-tronco hematopoiéticas e células imunes. Aqui, descrevemos uma versão modificada dessa nanopartícula para entregar simultaneamente RNP CRISPR Cas9 e modelos de DNA codificadores de transgenes (HDT) com aproximadamente 2,1 kb. Avaliamos esta HDT‐CRISPR‐AuNP para edição gênica em dois loci de interesse com diferentes cargas de transgenes. Essas nanopartículas entregam com sucesso a edição gênica em células T humanas primárias e células-tronco e progenitoras hematopoiéticas com a inserção de um transgene de receptor de célula T específico para antígeno. Este estudo de engenharia imunológica como prova de conceito demonstra uma nanoformulação sintética simples para co-delivery de toda a carga necessária para a entrega mediada por CRISPR de cassete de transgenes, com potencial para eficácia in vivo.