Investigando a Acetilação de Lisina em Proteínas

A acetilação de proteínas em resíduos específicos de lisina por enzimas acetiltransferases emergiu como uma modificação pós-traducional de alto impacto biológico. Embora a acetilação de lisina em proteínas histonas seja uma parte integral do código das histonas, a acetilação de uma multiplicidade de proteínas não-histonas foi recentemente reconhecida como um sinal regulatório em muitos processos celulares. Novos substratos de enzimas acetiltransferases estão sendo continuamente identificados, e a análise de locais de acetilação em proteínas é cada vez mais realizada por espectrometria de massa. No entanto, a caracterização da acetilação de lisina em proteínas usando técnicas espectrométricas apresenta algumas limitações e armadilhas. A acetilação não enzimática de cisteína, especialmente, pode resultar em identificação falsa-positiva de proteínas acetiladas. Aqui, demonstramos a aplicação de várias técnicas espectrométricas, como desorção/ionização a laser assistida por matriz e espectrometria de massa por ionização por eletrospray, para a análise da acetilação de proteínas. Descrevemos diversas combinações de métodos bioquímicos úteis para mapear os locais de acetilação em proteínas e discutimos suas vantagens e limitações. Como exemplo, apresentamos uma análise detalhada da acetilação da proteína transativadora de transcrição do HIV-1 (Tat), que é conhecida por ser acetilada in vivo pelas acetiltransferases p300 e fator associado a p300/CBP (PCAF).