Atividade Anti-Tumoral de Novo Lentivírus CAR Modificador de Genes em Modelos Humanizados

Resumo Introdução: Uma plataforma in vivo de modificação genética CAR (GCAR) foi desenvolvida para mitigar desafios clínicos e logísticos conhecidos com produtos CAR-T tradicionais manufaturados ex-vivo. A plataforma GCAR incorpora um lentivírus (LVV) lentivector direcionado ao CD3 reativo a NHP/humano com fusógeno resistente ao complemento que codifica CARs baseados em CD3zeta e uma proteína cosstimuladora sintética compacta (FD) otimizada para proliferação, persistência e citotoxicidade. A capacidade dos LVVs GCAR de induzir citotoxicidade potente, específica e persistente contra células-alvo foi avaliada in vitro e em modelos humanizados e de primatas não-humanos. Em M. nemestrina, o GCAR CD20 CAR foi avaliado para depleção de células B comparado a LVVs codificando CARs 41BB convencionais sem FD. Métodos: LVVs anti-CD19 ou anti-CD20 fabricados em escalas de 6L e 25L foram caracterizados para reatividade ao CD3 em M. nemestrina e PBMC humanos in vitro e in vivo. Ensaios de sensibilidade e ativação do complemento sérico foram usados para caracterizar LVVs GCAR (codificando CAR anti-CD20 e FD) contra soros humanos e NHP e linfócitos CD3 positivos. Doses crescentes (IV ou IN) de LVVs purificados foram avaliadas nos NHPs. Células B foram quantificadas por citometria de fluxo e segurança por química clínica, hematologia e avaliações físicas. Resultados: A exposição de PBMC humanos ou nemestrina a LVVs GCAR resultou em lise celular dose- e alvo-dependente com rápida eliminação tumoral em modelos disseminados Raji-Luc PBMC-humanizados DKO NSG. Em modelos humanizados com CD34, LVV GCAR gerou células CAR-T com depleção durável de células B por 8 semanas de observação. A administração de LVV GCAR CD20 (IV ou IN) foi bem tolerada em NHPs em todas as doses sem CRS grave ou toxicidade neurológica. A cinética da depleção de células B após dose IV de CARs CD20 com FD foi dose-dependente: doses minimamente ativas mostraram início tardio da depleção (a partir do dia 21 pós-dose) versus aplasia de células B no dia 7 nas doses mais ativas. Em contraste, um LVV GCAR comparável codificando CAR CD20 41BB (sem FD) por injeção IV e IN induziu depleção de células B em 7 dias pós-dose com duração reduzida. Conclusão: LVVs GCAR geraram linfócitos geneticamente modificados resultando em remoção durável de células dependente de CAR através de sistemas imunes mecanísticos, murinos, humanizados e de NHP. A incorporação de FD pode melhorar ainda mais a expansão e persistência celular, produzindo perfis de atividade CAR-T semelhantes ao ex vivo sem linfodepleção ou suporte citocínico. A ausência de sinais de segurança agudos e subagudos, baixa transdução fora do alvo, resistência ao complemento sérico e profunda depleção de células B suportam a plataforma GCAR como uma oportunidade potencial de próxima geração para investigação clínica como uma nova abordagem de modificação genética CAR. Formato da citação: Michael Betts, Matilda Mostrom, Ewa A. Jaruga-Killeen, Frederic Vigant, Anirban Kunda, Michelle Andraza, Cody Gowan, Iryna Oliinyk, Gregory Wade, Gregory Schreiber, Carter Bir, Jason P. Dufour, Robert V. Blair, Nicholas J. Maness, H. Michael Shepard, Gregory Ian Frost. Atividade anti-tumoral em modelos humanizados xenografo e aplasia de células B em primatas não-humanos com novo lentivírus CAR modificador de genes in vivo direcionado ao CD3 (GCAR) codificando receptores quiméricos de antígeno e uma proteína coestimuladora que melhora fitness celular abstract. In: Proceedings of the American Association for Cancer Research Annual Meeting 2026; Parte 1 (Abstracts Regulares); 17-22 abr 2026; San Diego, CA. Philadelphia (PA): AACR; Cancer Res 2026;86(7 Suppl):Abstract nr 276.