Engajador Trispecífico de Células T Codificado por mRNA para Tratamento de Câncer e Autoimunidade

Resumo Contexto: Terapias direcionadas a células B transformaram o tratamento de cânceres e doenças autoimunes dirigidos por células B, contudo as modalidades baseadas em células T atuais, incluindo células CAR-T e engajadores de células T (TCEs), são limitadas por preocupações de segurança tais como a síndrome da liberação de citocinas (CRS) — um risco particular para pacientes autoimunes que requerem margens amplas de segurança. Além disso, células plasmáticas impulsionam a progressão da doença e o recaimento, mas não são eliminadas eficientemente pelos tratamentos direcionados ao CD19. Para superar essas limitações, desenvolvemos um TCE trispecífico codificado por mRNA, primeiro de sua classe, direcionado a CD19, BCMA e CD3 para alcançar uma ampla depleção de células B e plasmáticas com segurança aprimorada. Métodos: O TCE foi construído pela fusão de um scFv ligado ao CD3 com domínios VHH que direcionam CD19 e BCMA. O mRNA codificante foi otimizado por engenharia de códons e estrutural para balancear o Índice de Adaptação de Códons (CAI) e Energia Livre Mínima (MFE) nas regiões não traduzidas e na sequência codificadora. O mRNA otimizado foi formulado em um novo nanopartícula lipídica (LNP) projetada para biodistribuição preferencial a órgãos linfóides secundários, incluindo baço, medula óssea e linfonodos. A citotoxicidade contra células B foi avaliada usando PBMCs de doadores saudáveis, pacientes autoimunes ou em ensaios de co-cultura em mieloma múltiplo BCMA+. A depleção de células B in vivo, farmacocinética, biodistribuição e segurança foram testadas em camundongos imunodeficientes humanizados reconstituídos com HSCs CD34+ ou PBMCs de lúpus eritematoso sistêmico (LES), em camundongos transgênicos para CD19/CD3 e em primatas não humanos (NHPs). A atividade contra tumores BCMA+ foi avaliada em xenotransplantes de mieloma múltiplo reconstituídos com PBMCs. Resultados: O TCE codificado por mRNA induziu citotoxicidade potente contra células B em ensaios com PBMCs humanos, alcançando uma EC50 de ∼0,1 pM. Depleção robusta de células B foi confirmada em múltiplos modelos murinos. No modelo LES-PBMC, o tratamento reduziu significativamente os níveis de autoanticorpos. Em camundongos portadores de tumor OPM2, o TCE induziu depleção profunda de células B CD19+ no sangue e tecidos linfóides e regressão completa dos tumores BCMA+. Em NHPs, dose ultra-baixa de mRNA-LNP (5 µg/kg) produziu depleção periférica completa de células B em 6 horas, com depleção ampla dos compartimentos de células naïve, de memória e plasmáticas em baço, linfonodos e medula óssea até o dia 15. A reconstituição de células B começou ∼3 semanas após a dose, predominando fenótipos naïve, sugerindo reinicialização imune. Dose subcutânea alcançou eficácia comparável à administração intravenosa, porém com liberação de citocinas significativamente reduzida, consistente com o perfil farmacocinético favorável da tradução do mRNA. Não foram observadas toxicidades ou anormalidades clínicas patológicas em doses até 100 µg/kg. Conclusão: Este TCE trispecífico codificado por mRNA CD19×BCMA×CD3 demonstra potente e ampla depleção de células B e plasmáticas, atividade antitumoral e perfil de segurança melhorado, apoiando a avaliação clínica inicial em humanos.