الملخص PR008: التحقيق في النسخ الجزيئي لخلايا CD8+ T المخترقة للأورام في سرطان الخلايا الكلوية (RCC) المقاوم لتثبيط نقاط التفتيش المناعية (ICI)

الملخص تعد العلاجات القائمة على التثبيط المناعي لنقاط التفتيش (ICI) هي أنجح العلاجات لمرضى سرطان الخلايا الكلوية المتقدم (RCC). ومع ذلك، لدى معظم المرضى الذين يعانون من سرطان الخلايا الكلوية المتقدم تقدم في المرض رغم علاج ICI، مما يقترح ضرورة تحليل الاختلافات المناعية بين المرضى الذين يستجيبون أو يقاومون علاج ICI. تُظهر خلايا CD8+ T تنوعًا في النوع الظاهري وتلعب دورًا حاسمًا في المناعة المضادة للورم، لكن من غير الواضح ما الذي يحدد الأنماط الظاهرية المختلفة لخلايا CD8+ T في بيئة الورم الدقيقة لـ RCC وكيف تؤثر الأنماط الفردية على الاستجابة أو المقاومة لـ ICI. تم جمع 70 عينة ورمية من 63 مريضًا بسرطان الخلايا الكلوية قبل (n = 48) أو بعد (n = 22) العلاجات (VEGFi، n = 9؛ العلاج الأحادي لـ ICI، n = 20؛ علاج تركيبي لـ ICI، n = 26؛ أخرى، n = 15). وتم جمع 11 عينة من مرضى بدون أورام. شملت متغيرات RCC 59 عينة من الخلايا الصافية و11 عينة من غير الخلايا الصافية. تم تصنيف 18 حالة كتحسن سريري و11 كعدم تحسن سريري. أجري تسلسل RNA للخلايا المفردة (10x Genomics) على هذه العينات لتوليد نسخة احتياطية لبيئة الورم الدقيقة لـ RCC. حدد التجميع المعتمد على الرسم البياني تجمعات أنواع الخلايا التي تم توضيحها بواسطة جينات النسل المعروفة. استخدم تحليل التحليل المصفوفي غير السالب (NMF) لتعرف برامج الجينات داخل خلايا CD8+ T المتعبة (Tex). تنبأ NicheNet بتفاعلات اللجند-الهدف بين الخلايا البلعمية وخلايا Tex. ضمن خلايا CD8+ T، حُددت خلايا Tex من خلال تعبير TOX وPDCD1 (PD-1) وHAVCR2 (TIM-3). أنتج NMF 4 برامج ضمن خلايا Tex تعبر عن علامات الجينات الفورية المبكرة، التعب/التنشيط، الإقامة النسيجية، واستجابة الإجهاد. ارتبط برنامج الإقامة النسيجية بالمقاومة لعلاج ICI (p = 0.05)؛ وكان برنامج الإجهاد مرتفعًا في استجابة ICI (p = 0.002). حدد NicheNet TGFb (TGFB1)، المنتج من الخلايا البلعمية في الأورام غير المستجيبة، كلجند ذو القدرة التنظيمية الأعلى الذي يولد الإقامة النسيجية في خلايا Tex. حدد NicheNet CD69 وIL7R كجينات بارزة متدنية عبر التعبير الجيني المرتبط بعدم التحسن السريري (p = 0.001). كان تعبير مستقبل TGFb (TGFBR2) أعلى (p = 0.01) في خلايا Tex من الأورام غير المستجيبة. تم استزراع خلايا CD8+ T الساذجة من خلايا دم مستقبلات صحية مع تحفيز تحت نقص الأكسجة (1% O2) أو الظروف المعتدلة، مع وجود أو دون TGFb. كانت خلايا T شبيهة بالإقامة النسيجية الإيجابية لـ CD69/CD103 أعلى مع TGFb تحت نقص الأكسجة (p = 0.02). في ظروف نقص الأكسجة (مُحاكاة لبيئة ورم RCC الدقيقة)، أدى TGFb إلى زيادة تعبير PD-1 على خلايا CD8+ T (p = 0.012). من خلال تحليل تسلسل RNA لخلايا مفردة، نحدد دائرة مقاومة ICI حيث تنتج الخلايا البلعمية المرتبطة بالورم TGF-beta، مما يؤدي إلى برنامج جيني للإقامة النسيجية في خلايا Tex المرتبطة بعدم الاستجابة للمناعة المناعية. تظهر الدراسات التجريبية أن TGFb ونقص الأكسجة كافيان لتحفيز الإقامة النسيجية وتعبير PD-1 على خلايا CD8+ T. توفر هذه الدراسة إطارًا لاستخدام تسلسل RNA لخلايا مفردة في تحديد آليات مقاومة ICI في RCC وتقترح محور TGFb كمسار يمكن استهدافه لتحسين المناعة المضادة للورم بواسطة خلايا CD8 T.