Estrategias terapéuticas para superar la resistencia a crizotinib en cánceres de pulmón no microcíticos con el oncogén de fusión EML4-ALK

El oncogén de fusión EML4-ALK (proteína similar a la de microtúbulos de equinodermos 4-quinasa anaplásica de linfoma) representa un objetivo molecular en un pequeño subconjunto de cánceres de pulmón no microcíticos (CPNM). Esta fusión conduce a una activación constitutiva de ALK con una potente actividad transformadora. En un ensayo clínico fase 1 fundamental, el inhibidor de la tirosina quinasa (ITK) de ALK crizotinib (PF-02341066) mostró una impresionante actividad antitumoral en la mayoría de los pacientes con CPNM que tenían fusiones ALK. Sin embargo, a pesar de estas notables respuestas iniciales, los cánceres desarrollan resistencia a crizotinib, usualmente dentro del primer año, limitando así el beneficio clínico potencial. Para determinar cómo los cánceres adquieren resistencia a los inhibidores de ALK, establecimos un modelo de resistencia adquirida a crizotinib exponiendo una línea celular de CPNM EML4-ALK positiva y altamente sensible a dosis crecientes de crizotinib hasta que surgió resistencia. Encontramos que las células resistentes a dosis intermedias de crizotinib desarrollaron amplificación del gen EML4-ALK. Las células resistentes a dosis más altas (1 μM) también desarrollaron una mutación gatekeeper, L1196M, dentro del dominio quinasa, haciendo que EML4-ALK fuera insensible a crizotinib. Esta mutación gatekeeper se detectó fácilmente usando un ensayo PCR alélico específico único y altamente sensible. Aunque crizotinib no fue efectivo contra EML4-ALK portando la mutación gatekeeper, observamos que dos inhibidores de ALK estructuralmente distintos, NVP-TAE684 y AP26113, fueron altamente activos contra las células cancerosas resistentes in vitro e in vivo. Además, estas células resistentes permanecieron altamente sensibles al inhibidor de Hsp90 17-AAG. Por lo tanto, hemos desarrollado un modelo de resistencia adquirida a inhibidores de ALK y hemos demostrado que los ITK de ALK de segunda generación o los inhibidores de Hsp90 son efectivos en el tratamiento de tumores resistentes a crizotinib que portan mutaciones secundarias gatekeeper.