Identificación de un ligando glicoproteico específico para P-selectina (CD62) en células mieloides.

La P-selectina (CD62, GMP-140, PADGEM), una lectina dependiente de Ca(2+) en plaquetas activadas y endotelio, funciona como un receptor para células mieloides al interactuar con lactosaminoglicanos sialilados y fucosilados. La P-selectina se une a un número limitado de sitios sensibles a proteasas en células mieloides, pero la(s) proteína(s) que portan los glicanos reconocidos por la P-selectina son desconocidas. Se usaron técnicas de transferencia en membrana de extractos de neutrófilos o células HL-60 con P-selectina marcada con 125I y cromatografía de afinidad de extractos de células HL-60 etiquetadas con 3H-glucosamina para identificar ligandos de P-selectina. Se identificó un ligando principal con un peso molecular aproximado de 250,000 M(r) en condiciones no reductoras y aproximadamente 120,000 bajo condiciones reductoras. La unión de P-selectina al ligando dependía de Ca2+ y fue bloqueada por anticuerpos monoclonales contra P-selectina. Una digestión breve con sialidasa aumentó el peso molecular aparente del ligando; sin embargo, una digestión prolongada abolió la unión de P-selectina. El tratamiento con Peptidasa:N-glicosidasa F redujo el peso molecular aparente del ligando en aproximadamente 3,000 sin afectar la unión a P-selectina. Experimentos de Western blot y de inmunodepleción indicaron que el ligando no era lamp-1, lamp-2 ni L-selectina, los cuales portan sialil Le(x), ni era leukosialina, una glicoproteína fuertemente sialilada de peso molecular similar. La interacción preferencial del ligando con P-selectina sugiere que podría desempeñar un papel en la adhesión de células mieloides a plaquetas activadas y células endoteliales.