HVT-basierter multi-Epitope-Impfstoff, subkutan oder in ovo verabreicht, steigert den Schutz des inaktivierten H9N2-Impfstoffs gegen heterologes Virus

Das H9N2-Vogelgrippevirus (AIV) stellt eine anhaltende Bedrohung dar, da inaktivierte Impfstoffe (InV) häufig den Virusausscheidung nicht verhindern können. Um dem entgegenzuwirken, haben wir ein rekombinantes Truthahn-Herpesvirus (HVT-BNT) entwickelt, das konservierte B- und T-Zell-Epitope von H9N2 AIV exprimiert, um sowohl die humorale als auch die zelluläre Immunität zu verbessern. HVT-BNT zeigte über 15 serielle Passagen genetische Stabilität und vergleichbare Wachstumskinetik wie der Elternstamm in vitro. Wir evaluierten Immunisierungsstrategien von HVT-BNT kombiniert mit InV bei 1 Tag alten Küken und 18 Tage alten Embryonen über subkutane (HVT-BNT+InV) bzw. in ovo (HVT-BNT-ovo+InV) Applikation. Im Vergleich zu InV allein induzierte HVT-BNT+InV signifikant höhere HI- und neutralisierende Antikörpertiter, erhöhte IgG- und IgM-Spiegel sowie einen größeren Anteil an CD8+ T-Zellen. Ähnlich zeigte die HVT-BNT-ovo+InV-Gruppe eine Tendenz zu höheren Werten in diesen Parametern. Bemerkenswert ist, dass während die InV-Gruppe keine signifikanten Unterschiede bei wichtigen immunologischen Cytokinen gegenüber der Kontrollgruppe zeigte, die kombinierten Immunisierungsgruppen eine signifikante Hochregulierung von IFN-α, IFN-β, IFN-γ, IL-2, IL-5, IL-6, IL-10 und IL-13 aufwiesen. Zudem bestätigten ELISPOT-Tests eine verstärkte IFN-γ-Sekretion als Reaktion auf konservierte AIV-Peptide (NP 380–393, NP 455–463 und NS1 98–106) in den kombinierten Immunisierungsgruppen. Nach einer heterologen H9N2-AIV-Herausforderung waren die oropharyngealen Positivraten in den kombinierten Gruppen bei 5 Tagen post Infektion (DPI) niedriger als in der InV-Gruppe. Ebenso waren die kloakalen Positivraten bei 3 und 5 DPI in den kombinierten Gruppen stärker verringert im Vergleich zur InV-Gruppe. Bis 7 DPI wurde die Virusausscheidung in beiden kombinierten Gruppen vollständig eliminiert, während die InV-Gruppe weiterhin über den Oropharynx Viren ausschrieb. Diese Ergebnisse zeigen, dass die HVT-BNT-basierte Impfstrategie sowohl die humorale als auch die zelluläre Immunantwort effektiv verstärkt und einen überlegenen frühen Schutz bietet. Während die in ovo-Strategie einen praktikablen Hatchery-Interventionsansatz darstellt, bietet die subkutane Verabreichung eine überlegene Immunaktivierung und Schutz im Vergleich zu konventionellem InV allein. • Rekombinantes HVT-BNT kombiniert mit inaktiviertem H9N2-Impfstoff verstärkt sowohl humorale als auch zelluläre Immunität. • Kombinierte Immunisierung reduziert die Virusausscheidung und beschleunigt die Eliminierung nach heterologer H9N2-Herausforderung. • Subkutane Verabreichung bietet besseren Schutz, während die in ovo-Impfung eine praktikable Intervention im Brüterei-Betrieb darstellt.